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引言

无竞争性抑制剂与酶-底物复合物结合,但不与游离酶结合。这可以降低有效Vmax和有效Km。底物-速度曲线向下和向左移动。

在存在几种浓度的抑制剂的情况下,通过测量底物速度曲线,可确定竞争性抑制剂的Ki。

循序渐进

创建一张XY数据表。在X列中输入底物浓度,在Y列中输入酶活性。每个数据集(Y列)表示从零开始在不同浓度抑制剂存在下收集的数据。在列标题中输入这些浓度。一定要输入浓度,而非浓度的对数。

输入数据后,点击“分析”,选择“非线性回归”,选择“酶动力学方程”窗格,然后选择无竞争性酶抑制

模型

VmaxApp=Vmax/(1+I/AlphaKi)

KmApp=Km/(1+I/AlphaKi)

Y=VmaxApp*X/(Kmapp+X)

 

常数I是抑制剂浓度,在每个列标题中输入的值。其约束为等于数据集常数。

参数VmaxKmKi共享,因此Prism拟合整个数据集的一个最佳拟合值。

解读参数

Vmax为最大酶反应速度缺乏抑制剂,采用与Y相同的单位表示

Km 米氏常数(缺乏抑制剂),采用与X相同的单位,其描述了在缺乏抑制剂时,底物和酶的相互作用。

AlphaKi 抑制常数,用在标题栏中输入的与 I 相同的单位表示。其为Ki(非常高,因为无竞争性抑制剂不与酶结合)和α(非常低)之积。不可能分别拟合α和Ki,而只能确定其乘积。有些书将该乘积叫做Ki’。

如果数据不能很好地拟合模型,则考虑改为拟合 竞争非竞争模型。或拟合更一般的方程 混合模型抑制

参考文献                                                                         

方程3.6,见:RA Copeland, 酶抑制剂在药物发现中的评价,Wiley 2005。IBSN:0471686964.RA Copeland, 酶抑制剂在药物发现中的评价,Wiley 2005。IBSN:0471686964.

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