引言

基于三元复合物模型，拟合别构调节剂与受体结合的“竞争”曲线。请注意，该模型假设别构调节剂处于过量状态，因此不会因与受体结合而耗尽。由于其结合位点与放射性配体不同，使用“竞争”一词并不恰当，但我们在此列出该项，是因为其实验设计与竞争性结合所用的设计相同。

分步操作

创建一个XY数据表。在X列中输入未标记调节剂浓度的对数（单位为nM），在Y列中输入以任意方便单位表示的特异性结合值。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争性结合方程”面板，并选择“别构调节剂滴定”。

您必须根据实验设计将两个参数约束为常数值：

•RadioligandNM 是标记配体的浓度（单位为 nM）。整个实验中使用单一浓度的放射性配体。

•HotKdNM 是标记配体的平衡解离常数（单位为 nM）。

还应考虑将 Y0（无调节剂条件下的放射性配体结合量）约束为常数值。

模型

AlloNM=10^(X+9)

KbNM=10^(logKb +9)

alpha=10^logAlpha

KAppNM=HotKDnm*(((1+(AlloNM/KBNM))/(1+alpha*(AlloNM/KBNM))))

热位点占用率 = 放射性配体NM / (放射性配体NM + 热位点KDnm)

Y=(Y0/HotOccupancy)*(RadioligandNM/(RadioligandNM + KAppNM))

 

 

参数解读

Kb 是调节剂结合的平衡解离常数（摩尔）。

α 是三元复合物常数。当 α=1.0 时，调节剂不改变结合。若 α 小于 1.0，则调节剂会降低配体结合。若 α 大于 1.0，则调节剂会增加结合。

Y0 表示无调节剂存在时的放射性配体结合量。建议将其限定为一个常数值。

注释

本模型旨在分析未标记化合物通过别构位点发挥作用的数据。由于标记和未标记配体通过不同的位点发挥作用，将此类实验称为“竞争性结合测定”是不恰当（且不正确）的。事实上，在某些情况下，别构调节剂会增强放射性配体的结合。

该模型旨在拟合α的对数，而非α本身。这是因为α的分布是不对称的（0 到 1 之间的所有值均表示调节剂降低结合，而 1 到无穷大之间的所有值均表示调节剂增强结合）。在对数坐标系下，其数值分布更为对称，因此基于对数坐标系计算的置信区间（如 Prism 所做）更为精确。

Y 轴绘制的是特异性结合。即使在极高的抑制剂浓度下，特异性结合也不会降至零。这是别构抑制的本质特征。如果 α 值非常高，则结合几乎被抑制至零；如果 α 值不高，则最大抑制程度较为温和。例如，当 α=3 时，最大抑制程度降至 33%。

该模型假设别构调节剂处于过量状态，因此您添加的浓度非常接近其游离浓度。当别构调节剂浓度成为限制因素时（例如G蛋白改变许多受体的激动剂结合时），该模型不适用。目前尚无显式模型能处理这种情况。您需要使用隐式方程（等号两边均为Y）来定义模型，而Prism无法处理此类方程。

参考文献                                                                                                       

A. Christopoulos 和 T. Kenakin，《药理学评论》（Pharmacol Rev），54: 323-374, 2002