引言

同源结合实验是指标记配体和未标记配体对受体的亲和力完全相同的一种实验。通常这是因为二者化学结构完全一致。通过分析不同浓度的未标记配体与一种（或更理想的是两种）浓度的标记配体之间对同一受体的竞争情况，可以确定受体的数量及其亲和力。

分步操作

创建一个XY数据表。将未标记化合物的浓度对数填入X轴，结合量填入Y轴。将标记配体的浓度（单位为nM）作为列标题。如果使用两种不同浓度的标记配体，将获得更佳的结果。

如果有多个实验条件，请将第一个条件放入A列，第二个放入B列，依此类推。使用子列输入重复实验数据。

从数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争性结合方程”面板，并选择“单结合位点 - 同源”。

模型

ColdNM=10^(x+9) ;低温浓度（单位：nM）

KdNM=10^(logKD+9) ;Kd（单位：nM）

Y=(Bmax*HotnM)/(HotnM + ColdNM + KdNM) + Bottom

 

参数解读

logKd：平衡解离常数的对数。由于该分析基于标记和未标记配体以相同亲和力结合的假设，因此 logKd 适用于配体的两种形式。

Bmax 是配体与受体结合的最大值，单位为 cpm。该值代表与所有受体的结合总量，因此高于曲线的顶部平台。

NS 是非特异性结合的度量。它是底部平台值（以 Y 轴单位表示）除以热配体的浓度（单位为 nM）。换言之，即热配体中以非特异性方式结合的部分所占的比例。

Prism 对曲线进行全局拟合，以从所有数据集中求得 logKd、Bmax 和 NS 的共同值

注

该模型假设“热”配体和“冷”配体与受体的结合方式完全相同，且您使用两种浓度的“热”配体（分别位于A列和B列……），并改变“冷”配体的浓度。该模型假设所添加配体中只有一小部分会结合，因此游离浓度接近您添加的浓度。