引言

在饱和结合实验中，通过改变放射性配体的浓度并测量结合情况，旨在测定两种受体的Kd值（即在平衡状态下结合到一半受体位点的配体浓度）和Bmax值（即最大结合位点数）。

配体不仅会结合到受体位点，还会结合到非特异性位点。处理非特异性结合有三种方法。

•扣除非特异性结合，仅分析特异性结合。请继续阅读了解此方法。

•仅分析总结合量，并根据总结合曲线的形状推断非特异性结合量。当存在两类受体时，此方法效果不佳。

•同时对总结合和非特异性结合进行整体分析。了解更多。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将放射性配体浓度输入 X 轴，特异性结合值输入 Y 轴。如果有多个实验条件，将第一个条件放入 A 列，第二个放入 B 列，依此类推。

另一种方法是将总结合值输入 A 列，非特异性结合值输入 B 列。然后使用“去除基线”分析从 A 列中减去 B 列，从而生成包含特异性结合值的新结果表。

在特异性结合数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”面板，并选择“双结合位点 - 特异性结合”。

模型

位点1=BmaxHi*X/(KdHi+X)

位点2=BmaxLo*X/(KdLo+X)

Y=位点1 + 位点2

 

参数解读

BmaxHi 和 BmaxLo 是两个结合位点的最大特异性结合量，单位与 Y 相同。

KdHi 和 KdLo 是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是达到平衡时实现半最大结合所需的放射性配体浓度

双位点结合的Scatchard图

下图左侧面板展示了放射性配体与两个独立结合位点的结合情况，这两个位点浓度相等，但 Kd 值相差十倍。两条单独的曲线分别以虚线和点划线表示。在实验中，您无法观察到各个组分，而是观察到它们的总和，即实线所示的曲线。请注意，这条曲线并不明显呈现双相特征。

右侧面板展示了相同数据绘制在Scatchard图上的情况。与每个受体的结合均以直线（点线或虚线）表示。绘制在Scatchard图上的总结合曲线呈弯曲状。请注意，代表与每种受体结合的两条直线并非该曲线的渐近线。

要绘制对应于非线性回归拟合的两条直线，请创建一个新的数据表，并如下所示定义这两条直线，使用非线性回归确定的 Bmax 和 Kd 值。

转到 Scatchard 转换数据的图表，并将新表格拖动到该图表上。使用“设置图表格式”对话框，利用连接线（但不使用符号）绘制表格中的两组数据集。