引言

在饱和结合实验中，通过改变放射性配体的浓度并测量结合情况，旨在确定Kd值（在平衡状态下，配体与受体位点结合达到一半时的配体浓度）和Bmax值（最大结合位点数）。

配体不仅会与受体位点结合，还会与非特异性位点结合。处理非特异性结合有三种方法。

•扣除非特异性结合，仅分析特异性结合。

•仅分析总结合量，并根据总结合曲线的形状推断非特异性结合的量。当配体结合到两个位点时，此方法效果不佳

•同时对总结合和非特异性结合进行整体分析。这是最佳方法，具体细节将在下文说明。

分步操作

创建一个XY数据表。将放射性配体浓度输入X列，总结合输入Y列，非特异性结合量输入B列。

X轴可使用任意方便的单位。Kd值将以相同的浓度单位显示。总结合和非特异性结合应使用相同的单位。Bmax值将以相同的单位显示。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”面板，并选择“双结合位点——总结合与非特异性结合”。

“背景”参数是指未添加放射性配体时测得的“结合”值，因此代表计数器背景（如有）。建议将其约束为常数零。

模型

Specific1=BmaxHi*X/(X+KdHi)

Specific2=BmaxLo*X/(X+KdLo)

非特异性=NS*X + 背景

<A>Y=Specific1 + Specific2 + Nonspecific

<B>Y=非特异性

 

<A> 和 <B> 的语法表示：第四行仅用于数据集 A（总结合），而第五行仅用于数据集 B（非特异性）。

参数 NS 和 Background 在两个数据集之间共享。

解读参数

BmaxHi 和 BmaxLo 是两个位点的最大特异性结合量，单位与 Y 相同。

KdHi 和 KdLo 是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是达到平衡时半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS 是非特异性结合的斜率，单位为 Y 除以 X。

Background 是未添加放射性配体时的非特异性结合量。这代表计数器的背景值。如果您的计数器会自动扣除背景信号，则可将 Background 限定为常数零。