引言

可以通过测量未标记配体与放射性配体结合的竞争情况，来确定该未标记配体的平衡解离常数。该模型假设存在两类结合位点，它们对放射性配体和竞争配体的亲和力不同。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将无标记化合物的摩尔浓度对数输入到 X 列，将结合值输入到 Y 列。如果有多个实验条件，请将第一个条件放在 A 列，第二个放在 B 列，依此类推。使用子列输入重复实验数据。

从数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争性结合方程”面板，然后选择“双结合位点——拟合 logIC50”。

模型

logEC50Lo=log(10^logKiLo*(1+HotNM/HotKdNMLo))

logEC50Hi=log(10^logKiHi*(1+HotNM/HotKdNMHi))

跨度=上限 - 下限

Part1=FractionHi*Span/(1+10^(X-LogEC50Hi) )

Part2=(1-FractionHi)*Span/(1+10^(X-LogEC50Lo) )

Y=Bottom + Part1 + Part2

 

 

 

参数解读

Top和Bottom是Y轴上的平台区。

FractionHi 是所有对竞争剂具有高亲和力的结合位点所占的比例。

logIC50Hi 和 logIC50Lo 分别是这两个 IC50 值的对数。

注

该模型拟合的是未标记配体的两个 IC50 值。它不会报告两个 Ki 值。Ki 值依赖于 IC50 值、放射性配体的浓度及其结合的 Kd 值。您可以使用其他方程直接拟合 Ki 值。

该分析假设您已知两个位点对标记配体的亲和力。在许多情况下，放射性配体对两个位点的亲和力相同。此时，只需将该值输入两次即可。如果两个位点对标记配体的亲和力不同，请输入两个值（由其他实验确定）。 请注意标签的含义。常数 HotKdnmHi 表示“热”配体与对非标记配体亲和力较高的受体之间的 Kd 值，而 HotKdnmLo 表示“热”配体与对非标记配体亲和力较低的受体之间的 Kd 值。 因此，HotKdnmHi 可能大于或小于 HotKdnmLo。

该分析假设结合是可逆的且处于平衡状态。它还假设标记配体和未标记配体竞争相同的结合位点。