引言

可以通过测定未标记配体与放射性配体结合的竞争情况，来确定该未标记配体的平衡解离常数。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将未标记化合物的摩尔浓度的对数输入到 X 列，将结合值输入到 Y 列。如果有多个实验条件，请将第一个条件放在 A 列，第二个放在 B 列，依此类推。使用子列输入重复实验数据。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争性结合方程”面板，然后选择“双结合位点——拟合 Ki”。

您必须根据实验设计将三个参数约束为常数值：

•HotNM 是标记配体的浓度（单位为 nM）。整个实验中使用单一浓度的放射性配体。

•HotKdNMHi 是标记配体在高亲和力位点上的平衡解离常数，单位为 nM。

•HotKdNMLo 是标记配体在低亲和力位点上的平衡解离常数，单位为 nM。

模型

 

logEC50Lo=log(10^logKiLo*(1+HotNM/HotKdNMLo))

logEC50Lo=log(10^logKiLo*(1+HotNM/HotKdNMLo))

Span=Top - Bottom

Part1=FractionHi*Span/(1+10^(X-LogEC50Hi) )

Part2=(1-FractionHi)*Span/(1+10^(X-LogEC50Lo) )

Y=Bottom + Part1 + Part2

 

 

 

 

参数解读

Top和Bottom是Y轴上的平台区。

FractionHi 是所有对竞争剂具有高亲和力的结合位点所占的比例。

logKi_Hi 和 logKi_Lo 分别是两个摩尔 Ki 值的对数。

注

该模型直接对未标记配体的两个 log(Ki) 值进行拟合。它不报告 IC50 值，因此您无需应用 Cheng 和 Prusoff 校正(1)。相反，您只需将放射性配体的浓度和其 Kd 作为常数输入，Prism 就会直接对您的冷化合物的 Ki 值进行拟合。 如果您希望拟合两个 IC50 值而非 Ki 值，请使用不同的方程。

该分析假设您已知标记配体对两个结合位点的亲和力。在许多情况下，放射性配体对两个结合位点的亲和力相同。此时，只需将该值输入两次即可。如果两个结合位点对标记配体的亲和力不同，请输入两个值（由其他实验确定）。 请注意标签的标注。 常数 KdHi 表示“热配体”与对无标记配体亲和力较高的受体之间的 Kd 值，而 KdLo 表示“热配体”与对无标记配体亲和力较低的受体之间的 Kd 值。因此，KdHi 可能大于或小于 KdLo。

该分析假设结合是可逆的且处于平衡状态。它还假设标记配体和未标记配体竞争相同的结合位点。

1. Cheng, Y. 和 Prusoff, W. H. 酶促反应的抑制常数 (K1) 与引起 50% 抑制的抑制剂浓度 (I50) 之间的关系。《生物化学药理学》，22: 3099-3108, 1973.