引言

当添加的放射性配体中有很大一部分与受体结合时，这种竞争性结合模型就非常有用，此时添加的浓度大于游离浓度。

这些方程允许所加配体中有相当大比例发生结合。该方法仅适用于放射性配体，因此所加配体和结合配体的测定均采用相同的“计数/分钟”单位。该方法不适用于荧光配体。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将未标记化合物的摩尔浓度的对数输入到 X 列，将结合量输入到 Y 列。Y 值必须以 cpm 为单位。

如果有多个实验条件，请将第一个条件放入A列，第二个放入B列，依此类推。使用子列输入重复实验数据。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争性结合方程”面板，并选择“单位点——异源结合（伴随耗竭）”。

您必须根据实验设计，将四个参数约束为常数值：

•Hot 表示标记配体的量（单位为 cpm）。整个实验中使用单一浓度的放射性配体。

•KdNM 是标记配体的平衡解离常数，单位为 nM。

•SpAct 是特异性放射性，单位为 cpm/fmol。

•Vol 为反应体积（单位：毫升）。

模型

KdCPM=KdnM*SpAct*vol*1000 

; nmol/L *(cpm/fmol * ml * 0.001 L/ml * 1000000 fmol/nmol) = cpm

R=NS+1

S=[1+10^(X-LogKi)]*KdCPM+Hot

a=-1*R

b=R*S+NS*Hot + Bmax

c = -1 * Hot * (S * NS + Bmax)

Y= (-1*b + √(b*b-4*a*c))/(2*a)

 

参数解读

logKI 是未标记配体的摩尔平衡解离常数的对数。

Ki 是以摩尔为单位的平衡解离常数。

Bmax 是配体与受体结合的最大值，单位为 cpm。这代表与所有受体的结合，因此高于曲线的最高平台值。

NS 是结合到非特异性位点上的放射性配体的比例。

注

该分析考虑到了添加的放射性配体中有很大一部分会与受体结合这一事实。如果您能够假设只有一小部分放射性配体会结合——这意味着您添加的浓度与游离浓度几乎相同——请使用替代分析。

 

参考文献                                                                         

该方程引自 S. Swillens（《分子药理学》，47: 1197-1203, 1995）