拟合剂量反应曲线以求得绝对IC50

绝对IC50的概念并非标准定义，许多人认为它没有实际用途。但如果您确实需要，通过拟合曲线来确定该值并不难。这份美国环保署（EPA）的文件提供了所需的计算公式（我对其进行了些许推广，因此数据无需事先归一化）。

Fifty=(Top+Baseline)/2

Y = 底部 + (顶部 - 底部) / (1 + 10^((LogIC50 - X) * HillSlope + log((顶部 - 底部) / (Fifty - 底部) - 1))) 

请注意参数“Bottom”与“Baseline”的区别。“Bottom”是曲线本身底部平台区的Y值；“Baseline”则是定义0%——即标准药物最大抑制率——的Y值。您肯定需要根据对照实验结果，将“Baseline”约束为一个常数值。您可能还需要约束“Top”的值。

下载将该方程拟合为上图所示图形的 Prism 文件。将数据拟合到该方程时，请务必将 Baseline 和 Top 约束为由对照组确定的适当值。此外，该文件还包含另一张图表，其中数据已归一化为 0 至 100% 的范围。 这些数据拟合于一个更简单的方程，其中“基线”被设为零，“峰值”被设为100。这些值已硬编码到方程中，因此您无需特意将这两个参数约束为常数值。  

针对归一化数据的另一种方法

如果您的数据是归一化的，可以采用以下替代方法。

1.请确保您的数据已针对某些对照组进行归一化处理。这意味着左端（低浓度）的响应值接近 100%，而高浓度处的响应值则高于 0%。 如果响应在 0% 处趋于平稳，则绝对IC50 和相对IC50 相同，此时只需拟合常规的剂量反应曲线即可求得 IC50。

2.在数据表底部添加一行新数据。在每一列的 Y 列中输入 50。此行的 X列留空。

3.使用非线性回归将数据拟合到 log(抑制剂) 与响应（变斜率）曲线中。

4.在非线性回归对话框的第一个（拟合）选项卡中，勾选“从标准曲线插值未知数”选项。当然，这些数据并非标准曲线，其中也存在未知数。但此选项会要求 Prism 在 Y=50 时插值曲线的 X 值。

5.在“约束”选项卡中，考虑将 Top 约束为常数值 100。如果您已使用良好的对照组对数据进行了标准化，那么您就知道曲线的顶部平台必须为 Y=100，因此应告知 Prism 使用该约束条件。

6.主结果表中报告的 IC50 将是相对 IC50。

7.请查看插值结果的“附加结果”页面，查阅当 Y=50 时的 X 值。该值即为绝对IC50。