引言
Kcat 是转数——即每个酶位点每单位时间将底物分子转化为产物的数量。在分析底物-反应速率曲线时，若已知酶位点的浓度，可使用 Kcat 代替 Vmax 进行拟合。
模型
Y = Et*kcat*X/(Km + X)
X 表示底物浓度。
Y 表示酶速率。
kcat 是转数，即每个酶位点每单位时间将底物转化为产物的次数。该值以 Y 轴时间单位的倒数表示。例如，如果 Y 的单位是每分钟的底物微摩尔数，那么 kcat 就是每个催化位点每分钟产生的底物分子数。
Km 是米氏常数，单位与 X 相同。它是达到酶速率半最大值所需的底物浓度。
Et 是酶催化位点的浓度。如果酶由多个亚基组成，请注意 Et 表示的是催化位点的浓度，该值可能大于酶分子的浓度。您输入的 Y 值应为以“浓度/时间”为单位的酶速率。 Et 必须以相同的浓度单位输入（而时间单位由 kcat 定义）。
Vmax 是最大酶速率，其单位与 Y 相同。它在上方的模型中未直接显示。这是将酶速率外推至极高底物浓度时的值，因此几乎总是高于实验中测得的任何速率。其计算方法是将 Et 与 kcat 相乘。
与米氏-门捷列夫模型的关系
上图所示曲线与米氏-门登模型定义的曲线完全一致。无论将哪个模型拟合到您的数据中，您都会得到完全相同的曲线，且Km值也完全相同。
米氏-门登模型求得的是 Vmax，即外推至极高底物浓度时的最大酶速率。其单位与您输入 Y 值（酶活性）时所用的单位相同。 通常，将其表示为（或转换为）摩尔/分钟/毫克蛋白质非常简单。Vmax 由酶位点数量（Et）以及酶将底物转化为产物的速率（kcat）决定。
如果您知道添加到实验中的酶位点浓度（Et），则可以使用上述模型拟合催化常数 Kcat。
计算 Kcat 时，浓度单位会相互抵消，因此 Kcat 以时间倒数为单位表示。它即转数——每个酶位点每单位时间将底物分子转化为产物的数量。
使用 Prism 拟合模型
1.创建一个XY数据表。将底物浓度输入X列，将酶速率输入Y列。如果有多个实验条件，将第一个条件放入A列，第二个放入B列，依此类推。您也可以选择Prism的示例数据：“酶动力学——米氏-门捷列夫模型”。
2.输入数据后，点击“分析”（Analyze），选择“非线性回归”（Nonlinear Regression），选择“酶动力学方程”面板，并选择 Kcat。
3.必须根据其他实验结果，将Et约束为一个常数值。要约束Et的值，请转到非线性回归对话框的“约束”选项卡，确保Et旁边的下拉菜单设置为“等于常数”，并输入该值。 对于示例数据，请将 Et 的值输入为 100。
如果您不知道 Et 的值，则无法拟合 kcat，而应拟合 Vmax。Prism 无法同时拟合 kcat 和 Et，因为这两个参数相互关联，且底物-速度曲线无法提供它们各自的具体数值。
4.根据示例数据，Prism 报告 Km= 5.886，其 95% 置信区间为 3.933 至 7.839。 kcat的最佳拟合值为13.53，其95%置信区间为11.97至15.09。
注
•请参阅所有酶动力学分析的假设列表。
•该方程拟合的曲线与拟合 Vmax 的方程完全相同，而非与周转数 Kcat 拟合的曲线。
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