引言
最常见的酶动力学实验是改变底物浓度并测量酶速率。其目的是确定酶的Km值（产生半最大速率的底物浓度）和Vmax值（最大速率）。如果您的目标是确定周转数kcat，而不是Vmax，请使用该方程的另一种形式。
分步操作
创建一个XY数据表。将底物浓度输入X列，酶速率输入Y列。如果有多个实验条件，请将第一个条件放在A列，第二个放在B列，依此类推。
您也可以选择 Prism 的示例数据：酶动力学 - 米氏-门捷列夫模型。
输入数据后，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“酶动力学方程”面板，并选择“米氏-门捷列夫酶动力学”。
模型
Y = Vmax*X/(Km + X)
参数解读
Vmax 是最大酶速率，单位与 Y 相同。它是酶在极高底物浓度下外推得到的速率，因此其值几乎总是高于实验中测得的任何速率。
Km 是米氏-门登常数，单位与 X 相同。它是达到半最大酶速率所需的底物浓度。
绘制 Lineweaver-Burk 图
在非线性回归技术出现之前，研究者必须将曲线数据转换为直线，以便进行线性回归分析。实现这一目标的一种方法是绘制莱纳韦弗-伯克图，该图以底物浓度的倒数为横轴，酶速率的倒数为纵轴。
若绘制了 Lineweaver-Burk 图，请仅将其用于展示数据。 切勿利用线性回归直线的斜率和截距来确定 Vmax 和 Km 的数值。若采用此方法，将无法获得最精确的 Vmax 和 Km 值。问题在于，这些转换（倒数运算）会扭曲实验误差，因此双倒数图不符合线性回归的假设条件。请使用非线性回归来获取最精确的 Km 和 Vmax 值。
要创建 Lineweaver-Burk 图（含对应直线），首先需记录非线性回归报告的 Vmax 和 Km 数值（后续会用到）。首先，在包含数据的数据表中，点击工具栏中的“分析”按钮，从“转换、归一化...”分析选项中选择“转换”，然后点击“确定”。 在“函数列表”下拉菜单中，选择“药理学和生物化学转换”。选择“Lineweaver-Burk”选项并点击“确定”（请确保已勾选“为结果创建新图表”复选框）。
现在，我们需要在 Lineweaver-Burk 图中添加相应的直线。请勿直接执行线性回归，因为如上所述，这将无法生成正确的直线。请按照以下步骤操作：
1.在转换后数据的图表中，点击工具栏“分析”区域中的“分析”按钮
2.在“生成曲线”分析部分中选择“绘制函数”，然后点击“确定”
3.在弹出的对话框中，于“函数”选项卡的函数列表中选择“直线”
4.使用“函数”选项卡底部的“X 值范围”选项来指定直线的起始点和终点
5.切换至“参数值与列标题”选项卡
6.计算 1/Vmax 并将其作为 Y 截距输入（其中 Vmax 是之前非线性回归报告的值）
7.将 Km/Vmax 输入为斜率（其中 Km 和 Vmax 是先前非线性回归报告的数值）
8.点击“确定”
9.Prism 将生成一个名为“绘制函数”的新数据表。点击并拖动该表至 Lineweaver-Burk 图上，然后点击“添加”
注释
•参见所有酶动力学分析的假设列表。
•该方程拟合的曲线与拟合转数 Kcat 而不是 Vmax 的方程完全相同。Kcat 与 Et（酶位点浓度）的乘积等于 Vmax，因此，如果已知 Et，Prism 即可拟合 Kcat。
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•请注意，Km 并非衡量酶与底物结合强度的结合常数。其数值既考虑了底物对酶的亲和力，也考虑了结合在酶上的底物转化为产物的速率。
