引言

可以通过测定未标记配体与放射性配体结合的竞争情况，来确定该未标记配体的平衡解离常数。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将无标记化合物的浓度对数输入到 X 列，将结合值输入到 Y 列。如果有多个实验条件，请将第一个条件放在 A 列，第二个放在 B 列，依此类推。使用子列输入重复实验数据。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争性结合方程”面板，然后选择“单结合位点——拟合 Ki”。

您必须根据实验设计将两个参数约束为常数值：

•HotNM 是标记配体的浓度（单位为 nM）。整个实验中使用单一浓度的放射性配体。

•HotKdNM 是标记配体的平衡解离常数（单位为 nM）。

模型

logEC50=log(10^logKi*(1+HotNM/HotKdNM))

Y = (Top - Bottom) / (1 + 10^(X - LogEC50)) + Bottom

 

 

参数解读

Top 和 Bottom 是 Y 轴上的平台区。

logKI 是未标记配体的摩尔平衡解离常数的对数。

Ki 是以摩尔为单位的平衡解离常数。

注

该模型直接拟合未标记配体的 Ki 值。它不报告 EC50 值，因此您无需应用 Cheng 和 Prusoff 校正(1)。相反，您只需将放射性配体的浓度和其 Kd 值作为常数输入，Prism 便会直接拟合您所用非放射性化合物的 Ki 值。 若需获取 IC50 值，请拟合 log(剂量)-剂量反应曲线。

若需获取 IC50 值（但在本情境下该值参考价值有限），请使用其他方程对数据进行拟合。

该分析假设存在一个结合位点，且结合是可逆的并处于平衡状态。

 

1. Cheng, Y. 和 Prusoff, W. H. 酶反应中抑制常数（K1）与引起50%抑制的抑制剂浓度（I50）之间的关系。《生物化学与药理学》（Biochem Pharmacol），22: 3099-3108, 1973.