在竞争性结合实验中,使用单一浓度的标记(热)配体,改变未标记(冷)药物的浓度,并在达到平衡时测量结合情况。
Prism 提供了用于拟合单结合位点或双结合位点的模型。您可以通过“比较”选项卡中的选项来对比这两种拟合结果。在将拟合结果与单结合位点和双结合位点模型进行比较时,请结合常识和统计数据进行判断。如果某个结合位点仅占总结合位点的极小部分,或者其 Ki 值超出实验中使用的竞争剂浓度范围,则不应采纳双结合位点模型。
如果添加的放射性配体中有很大一部分结合到了受体上,则配体会被耗尽,因此您添加的浓度将大于游离浓度。您需要将这些数据拟合到一个能考虑配体耗竭的模型中。
同源结合实验是指标记配体与未标记配体对受体的亲和力完全相同的情况。通常这是因为两者在化学结构上完全一致。受体数量和亲和力是通过分析不同浓度的未标记配体与一种(或更理想地,两种)浓度的标记配体之间的竞争来确定的。Prism 提供了一个专门用于拟合同源竞争实验的模型。
别构调节剂即使结合于不同位点,也能改变放射性配体的结合。由于“热”配体和“冷”配体结合于不同位点,“竞争”一词并不恰当,但我们在此纳入该模型,因为其实验设计与竞争性结合实验相同。Prism 可以基于三元复合物模型拟合别构调节剂引起的结合抑制(或增强)。 请注意,该模型假设别构调节剂处于过量状态,因此不会因与受体结合而耗尽。