引言

在饱和结合实验中，通过改变放射性配体的浓度并测量结合情况，旨在确定Kd（在平衡状态下结合到受体位点一半的配体浓度）和Bmax（最大结合位点数）。

该方程假设您已扣除非特异性结合，仅分析特异性结合。

该方程拟合Hill斜率。若假设Hill斜率为1.0（即单体与单个位点按质量作用律结合），请使用更简单的方程。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将放射性配体浓度输入 X 列，特异性结合量输入 Y 列。如果有多个实验条件，将第一个条件置于 A 列，第二个置于 B 列，依此类推。

另一种方法是将总结合输入A列，非特异性结合输入B列。然后使用“去除基线”分析将B列从A列中减去，从而生成包含特异性结合量的新结果表。

在特异性结合数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”面板，并选择“Hill斜率法下的特异性结合”。

模型

Y=Bmax*X^h/(Kd^h + X^h)

请注意，X 轴表示浓度，而非 log(浓度)。

参数解读

Bmax 是最大特异性结合量，单位与 Y 相同。它是将特异性结合量外推至极高放射性配体浓度所得的结果，因此其数值几乎总是高于实验中测得的任何特异性结合量。

Kd 是达到平衡时实现半最大结合所需的放射性配体浓度，其单位与 X 相同。若 h=1.0，则此值即为平衡解离常数。若 h 不等于 1.0，则 Kd 的分子意义依赖于 h 不为 1.0 的具体原因。

h 是 Hill斜率。当单体以无协同作用的方式结合到一个位点时，h 等于 1.0。当 h 大于 1.0 时，如图所示，曲线呈现出 S 形。这种情况发生在受体或配体具有多个具有正协同作用的结合位点时。当存在多个对配体亲和力不同的结合位点，或存在负协同作用时，Hill斜率小于零。  

注释

在第 7 版之前，该方程被称为“单位点 - 具有Hill斜率的特异性结合”。我们从名称中删除了“单位点”一词，因为如果Hill斜率不为 1.0，该方程实际上并不能描述对单个位点的结合。