在许多实验情况下，可以假设只有极小一部分配体与受体（或非特异性位点）结合。在这种情况下，还可以假设配体的游离浓度大致等于您加入的浓度。这一假设极大地简化了结合实验的分析，而标准方法依赖于这一假设。

在其他情况下，大部分配体会与受体结合（或发生非特异性结合）。这意味着溶液中游离配体的浓度并不等于您加入的浓度。这种差异在不同试管中或不同时间点并不相同。游离配体的浓度会因结合作用而减少。

许多研究者采用以下经验法则：若结合的配体少于10%，则无需担心配体耗竭；若结合的配体超过10%，则有三种选择：

•改变实验条件。在不改变组织量的情况下增加反应体积。这种方法的问题在于它需要更多的放射性配体，而放射性配体通常非常昂贵。

•测量每管中配体的游离浓度。若采用离心法或平衡透析法，此法可行；但若使用真空过滤法去除游离放射性配体，则操作相当困难。

•使用能够校正添加配体浓度与游离配体浓度之间差异的分析技术。Prism软件包含用于分析饱和和竞争性结合实验数据的此类模型。这些特殊分析仅适用于放射性配体，因此添加配体和结合配体的评估需采用相同的每分钟计数（cpm）单位。这些方法不适用于荧光配体。