引言

您无需直接测定非特异性结合。相反，您可以通过拟合总结合量来确定 Bmax 和 Kd，其方法是假设非特异性结合的量与放射性配体的浓度成正比。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将放射性配体浓度输入 X 列，将总结合输入 Y 列。如果有多个实验条件，请将第一个条件放在 A 列，第二个放在 B 列，依此类推。

X 和 Y 可使用任意方便的单位。Kd 将以与 X 相同的单位显示，Bmax 将以与 Y 相同的单位显示。

在总结合数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”面板，并选择“单结合位点 - 总结合”。

建议将“背景”参数限定为常数零。这是未添加放射性配体时的测得“结合”值，因此代表了可能存在的对照背景。

模型

Y=Bmax*X/(Kd+X) + NS*X + Background

 

参数解读

Bmax 是最大特异性结合量，单位与 Y 相同。

Kd 是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是达到平衡时实现半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS 是非特异性结合的斜率，单位为 Y 除以 X。

背景值是指未添加放射性配体时的非特异性结合量。这代表计数器的背景值。如果您的计数器会自动扣除背景信号，则可将背景值限定为常数零。

注释

此分析假设仅有极小比例的放射性配体发生结合，这意味着您添加的浓度与游离浓度几乎完全一致。若无法满足此假设，请使用替代分析。