引言

您无需直接测定非特异性结合。相反，您可以通过仅对总结合进行拟合来确定Bmax和Kd，其方法是假设非特异性结合的量与放射性配体的浓度成正比。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将放射性配体浓度输入到 X 列，将总结合输入到 Y 列。如果有多个实验条件，请将第一个条件放在 A 列，第二个放在 B 列，依此类推。

X和Y可使用任何方便的单位。Kd将以与X相同的单位显示，Bmax将以与Y相同的单位显示。

在总结合数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”面板，并选择“单结合位点——总结合”。

建议将“背景（Background）”参数约束为常数零。这是未添加放射性配体时的测得“结合”值，因此代表了可能存在的反背景。

模型

Y=Bmax*X/(Kd+X) + NS*X + 背景

 

参数解读

Bmax 是最大特异性结合量，单位与 Y 相同。

Kd 是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是达到平衡时实现半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS 是非特异性结合的斜率，单位为 Y 除以 X。

背景值是指未添加放射性配体时的非特异性结合量。这代表计数器的背景值。如果您的计数器会自动扣除背景信号，则可将“背景”限定为常数零。

注

该分析假设仅有极小比例的放射性配体发生结合，这意味着您添加的浓度与游离浓度几乎完全相同。若无法做出此假设，请使用替代分析。