引言

在饱和结合实验中，通过改变放射性配体的浓度并测量结合情况，旨在确定Kd（在平衡状态下结合到一半受体位点的配体浓度）和Bmax（最大结合位点数）。

配体不仅会结合到受体位点，还会结合到非特异性位点。处理非特异性结合主要有三种方法。

•扣除非特异性结合，仅分析特异性结合。

•仅分析总结合量，并根据总结合曲线的形状推断非特异性结合量。了解更多。

•同时对总结合和非特异性结合进行整体分析。这是最佳方法，详情如下所述。

分步操作

创建一个 XY 数据表。将放射性配体浓度输入 X 列，总结合输入 Y 列，非特异性结合量输入 B 列。

X 轴可使用任意方便的单位。Kd 值将以相同的浓度单位报告。总结合和非特异性结合应使用相同的单位。Bmax 值将以相同的单位报告。

或者选择示例数据集：结合 - 饱和结合（总结合与非特异性结合）。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”面板，并选择“单结合位点 - 总结合与非特异性结合”。

建议将“背景”参数限定为常数零。这是未添加放射性配体时的测得“结合”值，因此代表了可能存在的对照背景。

模型

特异性=Bmax*X/(X+Kd)

非特异性=NS*X + 背景

<A>Y=特异性+非特异性

<B>Y=非特异性

 

<A>和<B>的语法表示：第三行仅用于数据集A（总结合），而第四行仅用于数据集B（非特异性）。

参数 NS 和 Background 在两个数据集之间共享。

参数解读

Bmax 是最大特异性结合，单位与 Y 相同。它是外推至极高放射性配体浓度的特异性结合，因此其值几乎总是高于实验中测得的任何特异性结合。

Kd 是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是达到平衡时实现半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS 是非特异性结合的斜率，单位为 Y 除以 X。

背景值是指未添加放射性配体时的非特异性结合量。这代表计数器的背景信号。如果您的计数器会自动扣除背景信号，则可将背景值限定为常数零。