引言

在测量放射性配体的结合速率时，结合达到平衡的速率不仅依赖于结合速率常数和所用的配体量，还依赖于其解离速率常数。（为什么？）若仅通过分析单一浓度放射性配体的结合数据来拟合结合速率常数，唯一的方法是将解离速率常数限定为在另一项实验中确定的值。

确定结合速率常数的替代方法包括：对使用多种放射性配体浓度获得的数据进行全局拟合，或者分析同时测定结合速率和解离速率常数的序列实验。

分步操作

创建一个XY数据表。在X轴输入时间（单位：分钟），在Y轴输入特异性结合量。

在特异性结合表中，单击“分析”，选择“非线性回归”，选择“动力学结合方程”面板，然后选择“结合动力学 - 一种放射性配体浓度”。

必须将 Hotnm（[放射性配体]，单位为 nM）和 Koff（解离速率常数，单位为倒数分钟）约束为常数值。

模型

Kd=Koff/Kon

L=Hotnm*1e-9

Kob=Kon*L+Koff

占用率=L/(L+Kd)

Ymax=占用率*Bmax

Y=Ymax*(1 - exp(-1*kob*X))

参数解读

Kon 是结合速率常数，单位为 M⁻¹ min⁻¹

Koff 是解离速率常数，单位为 min⁻¹

Kd 是平衡解离常数，单位为摩尔，计算公式为 Koff/Kon

Bmax 是平衡时的最大结合量，外推至最大放射性配体浓度，单位与输入 Y 值时使用的单位相同。