质量作用定律

通过动力学结合实验可测定结合速率常数和解离速率常数。所有分析均假设结合过程遵循质量作用定律：

在任何给定时刻，受体-配体复合物的形成速率与放射性配体浓度及尚未被占用的受体数量成正比。解离速率与受体-配体复合物的浓度成正比。

解离速率

解离结合实验用于测定放射性配体从受体上解离的“解离速率”。最初，让配体与受体结合，直至达到平衡。 此时，需要阻断放射性配体与受体的进一步结合（通过添加未标记药物或稀释），以便测量解离速率；该解离过程遵循单相指数衰减，其速率常数等于放射性配体的解离速率。

结合速率

在结合实验中，您加入放射性配体，并在随后的不同时间点测量特异性结合量。

结合量随时间增加，直至达到平台期。该平台值与Bmax并不相同。结合实验中的平台值依赖于所用放射性配体的浓度，而Bmax则是外推至放射性配体浓度无限大时的值。

结合速率的增长受三个因素（以及 pH 值和温度等实验条件）的影响：

•结合速率常数 kon 或 k+1。这是您试图测定的参数。

•放射性配体的浓度。若使用更多放射性配体，系统将更快达到平衡。

•解离速率常数 koff 或 k⁻¹。有些人会惊讶地发现，观测到的结合速率在一定程度上依赖于解离速率常数。在孵育过程中，放射性配体既会与受体结合，也会从受体上解离。当这两种速率相等时，系统便达到平衡。 观测到的结合速率反映了达到平衡所需的时间。如果放射性配体从受体上解离得很快，系统将更快达到平衡（但结合量较少）。

因此，除非限制解离速率常数的值、使用两种或多种浓度的放射性配体测量结合动力学，或者在同一实验中同时测定结合速率和解离速率，否则无法通过简单的结合实验拟合来确定结合速率常数。